Cả ba biến thế chiến đấu cơ F-35 A/B/C đều được trang bị pháo 25 mm. Trong khi các biến thể dành cho Hải quân (F-35C) và Thủy quân lục chiến (F-35B), pháo được gắn ngoài thân máy bay và có độ chính xác tốt thì phiên bản F-35A pháo lại hoạt động thiếu chính xác và có thể nứt giá đỡ khi khai hỏa.